'Embryo Models' Challenge Concetti giuridici, etici e biologici | Rivista Quanta

Ad aprile, i ricercatori in Cina hanno riferito di aver avviato gravidanze nelle scimmie attraverso una procedura apparentemente molto simile alla fecondazione in vitro (IVF), in cui gli embrioni creati in un piatto sono stati impiantati negli uteri delle scimmie cynomolgus. Non sembrava esserci nulla di straordinario in questo, tranne che non si trattava di una vera fecondazione in vitro, perché gli embrioni non erano stati prodotti dalla fecondazione. Erano stati costruiti da zero da cellule staminali embrionali di scimmia, senza ovuli o sperma coinvolti. Non erano affatto veri embrioni, ma quelli che molti ricercatori chiamano modelli di embrioni (o talvolta "embrioni sintetici"). 

Il team multi-istituzionale di ricercatori, guidato da Zhen Lu presso lo State Key Laboratory of Neuroscience di Shanghai, cresciuto i modelli embrionali in vitro a uno stadio di sviluppo di circa nove giorni, che li rende equivalenti a quella che viene chiamata blastocisti negli embrioni normali. Quindi hanno trasferito i modelli in otto scimmie femmine. In tre delle scimmie, i modelli sono stati impiantati con successo nell'utero e hanno continuato a svilupparsi. Tuttavia, nessuna delle gravidanze è durata più di pochi giorni prima di interrompersi spontaneamente.

Nel frattempo, altri gruppi di ricerca hanno mostrato l'anno scorso fino a che punto questi modelli di embrioni realizzati con cellule staminali possono svilupparsi verso interi organismi. Squadre guidate da Magdalena Zernicka-Goetz presso l'Università di Cambridge e da Giacobbe Hanna al Weizmann Institute of Science di Rehovot, in Israele, li hanno ricavati da cellule staminali di topo e li hanno cresciuti in bottiglie di vetro rotanti piene di sostanze nutritive, che agivano come una specie di rozzo utero artificiale. Dopo circa otto giorni, è stato possibile distinguere l'asse centrale che, in un embrione normale, sarebbe diventato una colonna vertebrale, insieme al blob bulboso della testa nascente e persino un cuore pulsante primitivo. Dovresti essere un esperto per distinguere queste entità viventi da veri embrioni di topo in una fase di sviluppo comparabile.

Nessuno è del tutto sicuro di cosa siano i modelli di embrioni - biologicamente, eticamente o legalmente - o cosa potrebbero diventare alla fine. Potrebbero essere immensamente utili per la ricerca, rivelando aspetti dei nostri processi di sviluppo precedentemente al di là della portata degli esperimenti. Un giorno potrebbero anche essere usati per fornire tessuti e organi in miniatura per trapianti chirurgici. Ma sollevano anche profonde questioni etiche e filosofiche. 

Fino a poco tempo fa, i modelli di embrioni avevano solo una vaga somiglianza con embrioni reali, e solo nelle primissime fasi di crescita. Ma gli ultimi esperimenti di Zernicka-Goetz, Hanna e altri, compresi gli esperimenti di impianto a Shanghai, ci costringono ora a chiederci quanto bene e fino a che punto queste entità possano ricostruire la crescita degli embrioni naturali. Anche se attualmente è una prospettiva ipotetica lontana, alcuni ricercatori non vedono alcun motivo per cui i modelli di embrioni potrebbero non avere il potenziale per svilupparsi fino a diventare un bambino.

Non esiste una chiara ragione scientifica o medica per consentire loro di farlo, e molte ragioni etiche e legali per non farlo. Ma anche il loro uso come strumenti sperimentali solleva interrogativi urgenti sulla loro regolamentazione. Fino a che punto dovrebbe essere permesso ai modelli di embrioni di svilupparsi prima di fermare il lavoro? Al momento non ci sono regolamenti chiari che ne limitino la creazione, né alcun consenso su come dovrebbero essere i nuovi regolamenti. Per quanto promettenti siano i modelli di embrioni, sollevano preoccupazioni sul fatto che la ricerca stia superando la nostra capacità di decidere sui suoi limiti etici.

"I modelli di embrioni mantengono la promessa, o la minaccia, non solo di creare un modello realistico dello sviluppo di alcune parti di importanti organi umani, ma di portare a modelli realistici per tutti gli organi e i tessuti umani", ha affermato Hank Greely, professore di diritto e presidente del comitato direttivo del Center for Biomedical Ethics presso la Stanford University - "e potenzialmente, di creare nuovi bambini".

Ma al di là delle preoccupazioni etiche, i modelli di embrioni sollevano interrogativi sulla definizione stessa di persona e su ciò che conta come umano. Sfidano il modo in cui pensiamo a ciò che siamo.

Ripensare la regola dei 14 giorni

I libri di testo descrivono con sicurezza come un uovo umano fecondato progredisca gradualmente da una palla uniforme di cellule a un embrione impiantato a forma di gambero fino a un feto riconoscibilmente umano. Ma sappiamo poco inquietante di quel processo perché alcuni dettagli non possono essere studiati nell'utero senza compromettere la sicurezza dell'embrione. E in molti paesi è legale che gli embrioni umani vengano coltivati ​​e studiati in vitro solo per un massimo di 14 giorni, dopodiché devono essere soppressi.

Quel punto di due settimane è quando si verifica una delle fasi più cruciali dello sviluppo, chiamata gastrulazione. Come il biologo dello sviluppo Lewis Wolpert mettilo: "Non è la nascita, il matrimonio o la morte, ma la gastrulazione che è veramente il momento più importante della tua vita". Questo è quando il grumo piuttosto anonimo di cellule embrionali inizia a ripiegarsi e riorganizzarsi per acquisire i primi accenni di struttura corporea. Le cellule iniziano a specializzarsi nei tessuti che formeranno i nervi, gli organi interni, l'intestino e altro ancora. Un solco centrale chiamato striscia primitiva si sviluppa come precursore della colonna vertebrale, definendo l'asse centrale di simmetria bilaterale del corpo nascente.

Nel 1990, in seguito ai rapporti del Dipartimento della salute, dell'istruzione e del benessere degli Stati Uniti e del Comitato Warnock del Regno Unito anni prima, molti paesi hanno deciso che la formazione della striscia primitiva a 14 giorni dovrebbe segnare il limite per quanto tempo gli embrioni umani potrebbero essere mantenuti in vitro . Questa regola dei 14 giorni è stata successivamente implementata in le linee guida della Società internazionale per la ricerca sulle cellule staminali, che sono ampiamente seguiti dagli scienziati di tutto il mondo. Per decenni è stata una comoda restrizione, dal momento che gli embrioni umani generalmente smettono di crescere in vitro dopo soli cinque o sei giorni, intorno allo stadio in cui normalmente si impiantano nel rivestimento uterino.

Nel 2016, tuttavia, il team di Zernicka-Goetz a Cambridge e il biologo dello sviluppo Ali Brivanlu alla Rockefeller University e i suoi colleghi hanno entrambi dimostrato di poterlo fare coltivare embrioni di topo FIV fino fino alla fase della gastrulazione, utilizzando una matrice di gel polimerico morbido come una sorta di surrogato uterino.

Inoltre, Hanna e i suoi collaboratori hanno dimostrato nel 2021 di poter coltivare embrioni naturali di topo in vitro ben oltre la gastrulazione. Utilizzando il loro bioreattore rotante, in cui gli embrioni sono stati mantenuti in una soluzione nutritiva e in un'atmosfera con livelli di ossigeno e anidride carbonica controllati con precisione, il team ha coltivato embrioni di topo per 12 giorni, metà dell'intero periodo di gestazione per i topi. Hanna pensa che la tecnologia potrebbe funzionare anche con embrioni umani e forse potrebbe farli crescere per molte settimane, se gli obiettivi della scienza giustificassero il progetto in modo responsabile e la legge non lo vietasse.

Riconoscendo il nuovo potenziale per scoprire informazioni utili su come gli embrioni umani si sviluppano dopo la gastrulazione, la Società internazionale per la ricerca sulle cellule staminali ha rivisto le sue linee guida nel 2021. Ora raccomanda che il limite di 14 giorni per la ricerca sugli embrioni umani sia allentato su un caso- caso per caso, se è possibile addurre validi argomenti scientifici per estenderlo. Nessun paese ha ancora modificato le proprie leggi per sfruttare tale latitudine.

I modelli di embrioni potrebbero offrire un modo per percorrere quella strada con ancora meno restrizioni legali ed etiche. Non sono legalmente considerati embrioni perché non hanno il potenziale per crescere in organismi vitali. Quindi, anche in base alle attuali linee guida e regolamenti in molti paesi, se i modelli di embrioni possono essere coltivati ​​attraverso la gastrulazione e oltre, potrebbe diventare legale per la prima volta studiare sperimentalmente lo sviluppo umano e forse portare a una migliore comprensione dei difetti che causano aborti spontanei o deformità.

Ma se i modelli di embrioni possono davvero crescere così lontano, a che punto smettono di essere modelli e diventano equivalenti alla cosa reale? Quanto migliori e più avanzati sono i modelli, tanto più sfocati diventano i confini biologici ed etici.

Quel dilemma era ipotetico quando i modelli di embrioni potevano solo ricapitolare le primissime fasi di sviluppo. Non lo è più.

Trasformare le cellule staminali in embrioni

I modelli di embrioni sono generalmente costituiti da cellule staminali embrionali, cellule "pluripotenti" derivate da embrioni precoci che possono svilupparsi in ogni tipo di tessuto del corpo. Quando un embrione ha raggiunto lo stadio di blastocisti, intorno al quinto o sesto giorno dello sviluppo umano, è costituito da diversi tipi di cellule. Il suo guscio cavo è costituito da cellule che formeranno la placenta (chiamate cellule staminali del trofoblasto, o TSC) e il sacco vitellino (l'endoderma extraembrionale, o cellule XEN). Le cellule pluripotenti che diventeranno il feto sono confinate in un blob all'interno della parete della blastocisti, ed è da esse che si possono coltivare le cellule staminali embrionali.

Esperimenti negli anni '1990 e nei primi anni 2000 hanno dimostrato che le cellule staminali embrionali estratte da una blastocisti e trasferite in un'altra possono ancora diventare un embrione in grado di svilupparsi fino alla nascita a termine come animale sano. Ma il supporto fornito dalle TSC e dalle cellule XEN è essenziale: le cellule staminali embrionali da sole non possono superare i primi giorni di sviluppo a meno che non si trovino in una blastocisti.

Ricerche più recenti, tuttavia, mostrano che le strutture embrionali possono essere create da zero dai rispettivi tipi di cellule. Nel 2018, Zernicka-Goetz e i suoi colleghi hanno dimostrato che gli assemblaggi di cellule staminali embrionali, TSC e cellule XEN dei topi potrebbero auto-organizzarsi in una forma cava a forma di guscio di arachidi e paragonabile nell'aspetto a un normale embrione sottoposto a gastrulazione. Con il procedere della gastrulazione, alcune delle cellule staminali embrionali hanno mostrato segni di diventare più specializzate e mobili come preludio allo sviluppo degli organi interni.

Ma quei primi modelli embrionali erano imperfetti, ha detto Zernicka-Goetz, perché le cellule XEN aggiunte erano in una fase di sviluppo troppo avanzata per svolgere appieno il loro ruolo. Per risolvere questo problema, nel 2021 il suo gruppo ha trovato un modo per convertire le cellule staminali embrionali in cellule XEN allo stadio iniziale. "Quando abbiamo messo insieme [cellule staminali embrionali], TSC e queste cellule XEN indotte, ora potevano sottoporsi correttamente alla gastrulazione e avviare lo sviluppo degli organi", ha detto.

La scorsa estate a Natura, Zernicka-Goetz e i suoi collaboratori hanno descritto come avevano utilizzato un'incubatrice a bottiglia rotante per prolungare la crescita dei loro modelli embrionali di topo entro altre 24 ore cruciali, fino al giorno 8.5. Quindi i modelli hanno formato "tutte le regioni del cervello, cuori che battono e così via", ha detto. Il loro tronco mostrava segmenti derivanti per lo sviluppo in diverse parti del corpo. Avevano un tubo neurale, un intestino e i progenitori degli ovuli e degli spermatozoi.

In un secondo articolo pubblicato più o meno nello stesso periodo in Cell Stem Cell, il suo gruppo ha indotto cellule staminali embrionali diventare TSC così come le cellule XEN. Quei modelli di embrioni, coltivati ​​nell'incubatrice rotante, si sono sviluppati allo stesso stadio avanzato.

Nel frattempo, il team di Hanna in Israele stava coltivando modelli di embrioni di topo in modo simile, come descritto in a carta dentro Cella che è stato pubblicato poco prima dell'articolo del gruppo di Zernicka-Goetz. Anche i modelli di Hanna erano realizzati esclusivamente con cellule staminali embrionali, alcune delle quali erano state geneticamente persuase a diventare TSC e cellule XEN. "L'intero embrione sintetico pieno di organi, comprese le membrane extra-embrionali, può essere generato partendo solo da cellule staminali pluripotenti ingenue", ha detto Hanna.

I modelli di embrioni di Hanna, come quelli realizzati da Zernicka-Goetz, hanno attraversato tutti i primi stadi di sviluppo previsti. Dopo 8.5 giorni, avevano una forma del corpo grezza, con testa, gemme degli arti, un cuore e altri organi. I loro corpi erano attaccati a una pseudo-placenta fatta di TSC da una colonna di cellule come un cordone ombelicale.

"Questi modelli di embrioni ricapitolano molto bene l'embriogenesi naturale", ha detto Zernicka-Goetz. Le differenze principali possono essere conseguenze della formazione impropria della placenta, poiché non può contattare un utero. Segnali imperfetti dalla placenta difettosa possono compromettere la crescita sana di alcune strutture del tessuto embrionale.

Senza un sostituto migliore per una placenta, "resta da vedere quanto si svilupperanno ulteriormente queste strutture", ha detto. Ecco perché pensa che la prossima grande sfida sarà portare i modelli embrionali attraverso una fase di sviluppo che normalmente richiede una placenta come interfaccia per i sistemi sanguigni circolanti della madre e del feto. Nessuno ha ancora trovato un modo per farlo in vitro, ma dice che il suo gruppo ci sta lavorando.

Hanna ha riconosciuto di essere rimasto sorpreso dal modo in cui i modelli embrionali hanno continuato a crescere oltre la gastrulazione. Ma ha aggiunto che dopo aver lavorato su questo per 12 anni, "sei eccitato e sorpreso ad ogni traguardo, ma in uno o due giorni ti ci abitui e lo dai per scontato, e ti concentri sul prossimo obiettivo".

Jun Wu, un biologo di cellule staminali presso il Southwestern Medical Center dell'Università del Texas a Dallas, è rimasto sorpreso dal fatto che i modelli di embrioni realizzati solo con cellule staminali embrionali possano arrivare così lontano. "Il fatto che possano formare strutture embrionali con una chiara organogenesi precoce suggerisce che possiamo ottenere tessuti apparentemente funzionali ex utero, basati esclusivamente su cellule staminali", ha affermato.

In un'ulteriore ruga, si scopre che i modelli di embrioni non devono essere coltivati ​​​​da cellule staminali embrionali letterali, ovvero cellule staminali raccolte da embrioni reali. Possono anche essere cresciuti da cellule mature prelevate da te o da me e regredite a uno stato simile a una cellula staminale. La possibilità di un tale "ringiovanimento" dei tipi cellulari maturi era la scoperta rivoluzionaria del biologo giapponese Shinya Yamanaka, che gli è valso una quota del Premio Nobel 2012 in Fisiologia o Medicina. Tali cellule riprogrammate sono chiamate cellule staminali pluripotenti indotte e sono prodotte iniettando cellule mature (come le cellule della pelle) con alcuni dei geni chiave attivi nelle cellule staminali embrionali.

Finora, le cellule staminali pluripotenti indotte sembrano in grado di fare praticamente tutto ciò che possono fare le cellule staminali embrionali reali, inclusa la crescita in strutture embrionali in vitro. E quel successo sembra recidere l'ultima connessione essenziale tra modelli di embrioni ed embrioni reali: non c'è bisogno di un embrione per crearli, il che li pone in gran parte al di fuori delle normative esistenti.

Organi in crescita in laboratorio

Anche se i modelli di embrioni hanno una somiglianza senza precedenti con gli embrioni reali, hanno ancora molti difetti. Nicola Rivron, biologo di cellule staminali ed embriologo presso l'Istituto di biotecnologia molecolare di Vienna e uno dei collaboratori di Zernicka-Goetz, riconosce che "i modelli di embrioni sono rudimentali, imperfetti, inefficienti e non hanno la capacità di dare origine a un organismo vivente".

Il tasso di fallimento per i modelli di embrioni in crescita è molto alto: meno dell'1% dei cluster cellulari iniziali arriva molto lontano. Sottili anomalie, che riguardano principalmente dimensioni sproporzionate degli organi, spesso le spengono, ha detto Hanna. Wu ritiene che sia necessario più lavoro per comprendere sia le somiglianze con gli embrioni normali sia le differenze che potrebbero spiegare perché i modelli di embrioni di topo non sono stati in grado di crescere oltre gli 8.5 giorni.

Tuttavia, Hanna è fiduciosa che saranno in grado di estendere tale limite migliorando il dispositivo culturale. "Attualmente possiamo coltivare embrioni di topo [IVF] ex utero fino al giorno 13.5 - l'equivalente per gli embrioni umani sarà intorno al giorno 50-60", ha detto. "Il nostro sistema apre la porta."

Ha aggiunto: "Quando si tratta di studiare lo sviluppo umano precoce, credo che questo sia l'unico modo possibile".

Marta Shabazi, un biologo cellulare di Cambridge che lavora sull'embriogenesi, è d'accordo. "Per gli esseri umani, un sistema equivalente [ai modelli di embrioni di topo] sarebbe davvero utile, perché non abbiamo un'alternativa in vivo per studiare la gastrulazione e l'organogenesi precoce", ha affermato.

Resta da vedere se questo può essere fatto con le cellule umane. "Ci stiamo ancora riprendendo dallo shock che può essere fatto nei topi", ha detto Hanna. Ma sia lui che Zernicka-Goetz hanno affermato di essere incoraggiati dai risultati che stavano già vedendo nei rispettivi laboratori con modelli di embrioni precoci cresciuti da cellule staminali umane. "Questo è solo l'inizio di un lungo percorso di apprendimento e scoperta", ha detto Hanna.

In teoria, modelli di embrioni umani cresciuti fino a uno stadio avanzato di sviluppo potrebbero diventare fonti di organi per trapianti e ricerca. "Sebbene gli embrioni sintetici che produciamo siano distinguibili dagli embrioni naturali", ha detto Hanna, "hanno ancora tutti gli organi e nella giusta posizione".

Le cellule staminali pluripotenti embrionali e indotte in vitro possono attualmente essere guidate a crescere in organi rudimentali in miniatura (o "organoidi”) di pancreas, rene e anche il tessuto cerebrale. Ma gli organoidi in genere non riescono a riprodurre accuratamente la struttura degli organi reali, probabilmente perché mancano di segnali essenziali e componenti multicellulari che si presenterebbero naturalmente negli embrioni reali. "Prevediamo che questi difetti potrebbero essere corretti generando strutture che ricapitolano i processi naturali che si verificano durante lo sviluppo", ha affermato Zernicka-Goetz.

Hanna pensa che i modelli di embrioni potrebbero anche essere usati per identificare bersagli farmacologici e vagliare nuove terapie, in particolare per problemi riproduttivi come infertilità, perdita di gravidanza, endometriosi e preeclampsia. "Questo fornisce un'alternativa etica e tecnica all'uso di embrioni, ovociti o materiali derivati ​​dall'aborto ed è coerente con le ultime linee guida ISSCR", ha affermato. Ha già fondato una società per testare potenziali applicazioni cliniche di modelli di embrioni umani.

Ma Alfonso Martínez Arias, un biologo dello sviluppo dell'Università di Cambridge e Pompeu Fabra di Barcellona che studia il ruolo delle cellule staminali embrionali nello sviluppo dei mammiferi, sottolinea che tali applicazioni rimangono non provate. Pensa che sia difficile capire quanto si possa capire sulle questioni della vera crescita dell'embrione dallo sviluppo di una versione così distorta.

Inoltre, ha detto, niente di tutto questo è stato ancora dimostrato negli esseri umani. "Non credo che dovremmo avanzare in un campo attraverso un pio desiderio, ma con i fatti", ha detto.

La frontiera etica

Finché i modelli di embrioni rimangono solo modelli, il loro uso nella ricerca e nella medicina potrebbe non suscitare molte controversie. "Un principio etico di base chiamato sussidiarietà stabilisce che un obiettivo scientifico o biomedico dovrebbe essere raggiunto utilizzando il modo meno problematico dal punto di vista morale", ha affermato Rivron. Per la ricerca sui problemi di salute globale come la pianificazione familiare, ha affermato, gli studi sui modelli di embrioni sembrano un'alternativa meno impegnativa dal punto di vista etico rispetto al lavoro sugli embrioni di fecondazione in vitro.

"Dobbiamo ricordare che gli embrioni sintetici non sono veri embrioni", ha detto Hanna. Finora, mancano del potenziale cruciale per crescere in un vero feto, per non parlare di un bambino: se vengono impiantati nei topi, non si sviluppano ulteriormente.

Ma la capacità di ulteriore sviluppo è fondamentale per lo status etico dei modelli embrionali, e non c'è alcuna garanzia che la loro attuale incapacità di produrre feti e nati vivi persisterà.

Rivron concorda sul fatto che il lavoro sui modelli di embrioni che lui e altri stanno facendo potrebbe portare a una nuova tecnologia riproduttiva. "Possiamo prevedere che i modelli embrionali più completi a un certo punto si ribalteranno per diventare embrioni che daranno origine a individui", ha affermato. "Credo che questi individui dovrebbero essere pienamente autorizzati come esseri, indipendentemente dal modo in cui si sono formati".

Per questo motivo, sta lavorando con esperti di etica per definire un quadro etico per questi studi. "Il tentativo di utilizzare embrioni umani formati da cellule staminali per la riproduzione assistita potrebbe diventare possibile un giorno", ha detto, "ma richiederebbe un'esauriente discussione preventiva e una valutazione sulla sicurezza, socialmente ed eticamente giustificabile e auspicabile".

Ma le questioni etiche non entrano in gioco solo se la tecnologia viene utilizzata per la riproduzione umana. Greely ritiene che "se un modello di embrione è 'abbastanza simile' a un embrione umano 'normale', dovrebbe essere trattato come un embrione umano per scopi legali e normativi, inclusa, ma non limitata a, la regola dei 14 giorni o qualsiasi revisione di esso.

Cosa conta come abbastanza simile? Tale criterio sarebbe soddisfatto, ha affermato, "se il modello embrionale ha una probabilità significativa di essere in grado di produrre un bambino umano vivente".

Il problema è che potrebbe essere molto difficile sapere con certezza se questo è il caso a meno di impiantare un modello di embrione umano in un utero. L'unico modo per determinare lo status etico di una tale entità potrebbe quindi essere non etico.

Un lavoro come quello del team cinese con modelli di embrioni di scimmia, tuttavia, potrebbe precludere tale incertezza. Se queste entità simili a embrioni possono indurre gravidanze e un giorno produrre prole nelle scimmie, potremmo ragionevolmente dedurre che potrebbero farlo anche modelli di embrioni umani equivalenti. In un commento su quel lavoro, Inso Hyun, il direttore dell'etica della ricerca presso il Center for Bioethics della Harvard Medical School, ha scritto: "È a questo punto che i modelli di embrioni umani potrebbero essere considerati così accurati da equivalere a essere la cosa reale dal punto di vista funzionale".

Un tale risultato, anche se solo nelle scimmie, potrebbe indurre i regolatori a decidere che i modelli di embrioni umani meritano di essere trattati come embrioni, con tutte le relative restrizioni. Alcuni ricercatori ritengono che abbiamo urgentemente bisogno di una nuova definizione di embrione per offrire chiarezza e tenere il passo con i progressi scientifici. Se ci sono buone ragioni per supporre che un modello embrionale abbia il potenziale per generare una prole vitale, dovremo accettare le implicazioni normative o trovare modi per annullare tale potenziale.

Questi sono i dilemmi di una tecnica che potrebbe offuscare le nostre vecchie idee su ciò che si qualifica come umano e su come vengono create le persone. Bartha Maria Knoppers, professore e presidente di ricerca presso la McGill University in Canada e un'autorità in materia di etica della ricerca, ha scritto un commento per Scienze con Greely in cui descrivevano sviluppi come modelli di embrioni come "rosicchiare la definizione legale di cosa sia un essere umano". Più scopriamo come siamo fatti e come potremmo essere, meno è chiaro che la scienza può portare chiarezza a questa domanda.

Correzione: 13 giugno 2020
La menzione dell'articolo di Zernicka-Goetz del 2016 sulla coltivazione di embrioni di topo per fecondazione in vitro in una matrice di gel è stata aggiunta insieme alla citazione del lavoro simile di Brivanlou.